人朊蛋白不同N-糖基化修飾突變體的構建及其在哺乳動物細胞中表達

構建并表達人朊蛋白N-糖基化修飾位點突變的真核表達載體,有助于進一步研究朊蛋白N-糖基化修飾的生物學功能.定點突變野生型人朊蛋白基因PRNP,將獲得的突變體亞克隆至真核表達載體pcDNA3.1中,并在人宮頸癌細胞株HeLa中瞬時表達各種朊蛋白糖基化修飾位點突變體,利用免疫印跡和糖苷酶消化等糖蛋白分析方法鑒定表達產(chǎn)物的糖基化形式.經(jīng)Western blot鑒定,野生型和突變型朊蛋白表達產(chǎn)物出現(xiàn)不同形式的泳動特征,分別出現(xiàn)特異性糖基化修飾的多個條帶,單糖基化修飾的兩條條帶和無糖基化修飾的一條條帶.經(jīng)PNGase F糖苷酶消化,野生型和糖基化單點突變型表達產(chǎn)物均能被糖苷酶消化,其分子量下移,去糖基化突變型表達產(chǎn)物的分子條帶位置不變.通過突變野生型人朊蛋白基因PRNP的N-糖基化修飾位點,獲得單糖基化修飾和去N-糖基化修飾的6種人朊蛋白突變體,并能夠在HeLa細胞株中瞬時表達單糖基化修飾和去N-糖基化修飾朊蛋白,為進一步研究朊蛋白的相關功能建立良好基礎.

作 者： 楊洋 陳嵐 韓兵社 許彩民 潘華珍 YANG Yang CHEN Lan HAN Bing-She XU Cai-Min PAN Hua-Zhen   作者單位： 中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所,中國協(xié)和醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院,醫(yī)學分子生物學國家重點實驗室,北京,100005  刊 名： 生物工程學報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號： Q513+.2 Q812  關鍵詞： 朊蛋白   N-糖基化修飾   糖蛋白  

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