hERβ全長(zhǎng)基因真核表達(dá)載體pEGFP-C1-hERβ的構(gòu)建及其在PC-3M細(xì)胞中的表達(dá)

目的:構(gòu)建人雌激素受體β(hERβ)全長(zhǎng)基因的真核表達(dá)載體pEGFP-C1-hERβ,并轉(zhuǎn)染激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3M.方法:采用RT-PCR法從卵巢囊腫患者切除的部分正常卵巢組織中釣取hERβ全長(zhǎng)基因(1 593 bp),與pMD18-T載體連接做全自動(dòng)序列測(cè)定.將測(cè)序正確的克隆質(zhì)粒pMD18-T-hERβ和表達(dá)載體pEGFP-C1分別用HindⅢ和BamH Ⅰ進(jìn)行雙酶切,應(yīng)用基因重組技術(shù)構(gòu)建hERβ全長(zhǎng)基因真核表達(dá)載體pEGFP-C1-hERβ.質(zhì)粒經(jīng)HindⅢ和BamHⅠ雙酶切和PCR電泳鑒定后,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染PC-3M細(xì)胞.結(jié)果:重組質(zhì)粒經(jīng)限制性酶切鑒定得到與hERβ全長(zhǎng)基因長(zhǎng)度一致(1 612 bp)的酶切產(chǎn)物;測(cè)序分析證實(shí),PCR產(chǎn)物與GenBank上登錄的hERβ基因(NM_001437)序列完全一致,表明成功地完成了hERβ的擴(kuò)增和表達(dá)載體的構(gòu)建;熒光顯微鏡下可見(jiàn)轉(zhuǎn)染的PC-3M細(xì)胞有綠色熒光蛋白的表達(dá);PCR測(cè)定分析,轉(zhuǎn)染細(xì)胞hERβ的表達(dá)增加.結(jié)論:構(gòu)建完成真核表達(dá)載體pEGFP-C1-hERβ,hERβ基因在PC-3M細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá).

作 者： 李峰 邵月婷 何靜春 秦宣鋒 陳超 王馭良 孫連坤 李揚(yáng) 趙雪儉 LI Feng SHAO Yue-ting HE Jing-chun QIN Xuan-feng CHEN Chao WANG Yu-liang SUN Lian-kun LI Yang ZHAO Xue-jian   作者單位： 李峰,邵月婷,何靜春,孫連坤,李揚(yáng),趙雪儉,LI Feng,SHAO Yue-ting,HE Jing-chun,SUN Lian-kun,LI Yang,ZHAO Xue-jian(吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室,吉林大學(xué)前列腺疾病防治研究中心,吉林,長(zhǎng)春,130021)

秦宣鋒,陳超,王馭良,QIN Xuan-feng,CHEN Chao,WANG Yu-liang(吉林大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)一系2002級(jí)) 

刊 名： 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)  年，卷(期)： 2006 32(2)  分類號(hào)： Q786 Q785  關(guān)鍵詞： 受體,雌激素   激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞   前列腺腫瘤   真核表達(dá)   遺傳載體   轉(zhuǎn)染  

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