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SUMO-1小干擾RNA的構(gòu)建及其干擾效果檢測
目的:構(gòu)建小泛素相關(guān)修飾物-1(SUMO-1)基因的小干擾RNA(siRNA),并檢測其對SUMO-1基因表達的干擾效果.方法:根據(jù)SUMO-1基因序列設(shè)計一條合理的SUMO-1 siRNA,并將其克隆到pSliencer2.1-U6 neo載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,挑取陽性菌落進行酶切和測序鑒定;將構(gòu)建的SUMO-1 siRNA重組質(zhì)粒單獨轉(zhuǎn)染或與帶HA標(biāo)簽的SUMO-1表達載體共同轉(zhuǎn)染人胚腎293T細胞,收集細胞裂解物,以抗HA和SUMO-1的抗體用Westem印跡檢測siRNA的干擾效果.結(jié)果:構(gòu)建了SUMO-1 siRNA重組質(zhì)粒,干擾效果可達80%以上.結(jié)論:構(gòu)建的SUMO-1 siRNA為進一步進行蛋白質(zhì)SUMO-1化修飾的研究奠定了基礎(chǔ).
作 者: 任雯 韋瑋 葉棋濃 REN Wen WEI Wei YE Qi-Nong 作者單位: 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物工程研究所,北京,100850 刊 名: 生物技術(shù)通訊 ISTIC 英文刊名: LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年,卷(期): 2010 21(2) 分類號: Q78 關(guān)鍵詞: SUMO化 SUMO-1 小干擾RNA 表達載體【SUMO-1小干擾RNA的構(gòu)建及其干擾效果檢測】相關(guān)文章:
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