用硫氧還蛋白融合表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)小鼠內(nèi)皮抑素的方法研究

目的探索用硫氧還蛋白融合表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)小鼠內(nèi)皮抑素(endostatin)重組蛋白的最佳生產(chǎn)工藝路線.方法用pThioHis-endo重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化不同的大腸桿菌BL21、JM109、DH5α,經(jīng)幾種不同濃度的異丙基硫代半乳糖苷(isopropylthio-galactoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)重組融合蛋白,或誘導(dǎo)表達(dá)不同時(shí)間后,采用SDS-PAGE分析表達(dá)產(chǎn)物;按所優(yōu)化的條件進(jìn)行重組內(nèi)皮抑素的表達(dá)、包涵體的提取、洗滌、變性和復(fù)性,最后經(jīng)Ni+柱純化,再通過SDS-PAGE分析純化的結(jié)果.結(jié)果3種大腸桿菌表達(dá)效果相差無幾,最佳IPTG的濃度0.9 mmol/L,最佳誘導(dǎo)時(shí)間為5 h,經(jīng)Ni+柱純化后可獲得可溶性的重組內(nèi)皮抑素.結(jié)論利用本實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化條件可獲得高產(chǎn)量、高純度、可溶性的小鼠內(nèi)皮抑素重組蛋白.

作 者： 馬衛(wèi)列 劉芳 何承偉 MA Wei-lie LIU Fang HE Cheng-wei   作者單位： 廣東醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室,湛江,524023  刊 名： 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE  年，卷(期)： 2006 28(14)  分類號(hào)： Q503 Q51 Q591.2  關(guān)鍵詞： endostatin   硫氧還蛋白融合表達(dá)系統(tǒng)   融合蛋白  

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