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糞腸球菌Ace重組蛋白的表達(dá)、純化及黏附活性研究

時(shí)間:2023-04-27 04:33:13 生物醫(yī)學(xué)論文 我要投稿
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糞腸球菌Ace重組蛋白的表達(dá)、純化及黏附活性研究

構(gòu)建含糞腸球菌表面蛋白Ace保守序列A的重組載體,在大腸埃希菌M15中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)、純化表達(dá)產(chǎn)物,研究其黏附活性.以糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)株JB2-2為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增ace基因保守序列A,構(gòu)建重組質(zhì)粒pQE30/Ace,轉(zhuǎn)化至表達(dá)宿主菌M15中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),利用SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行分析和鑒定表達(dá)結(jié)果,Ni-NTA親和層析柱純化重組蛋白,同時(shí)用純化的Ace重組蛋白免疫新西蘭兔,用所得相應(yīng)的抗血清分別進(jìn)行黏附和黏附抑制實(shí)驗(yàn).結(jié)果可見,構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定和測(cè)序鑒定證明其中插入片段為ace基因保守序列A,測(cè)序結(jié)果與Genbank上登錄序列完全一致;SDS-PAGE分析顯示,重組工程菌表達(dá)了一相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約為37 ku的目的蛋白條帶,Western blot檢測(cè)其能與6×His單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng).糞腸球菌JH2-2能夠黏附于膠原蛋白Ⅰ表面;抗Ace多克隆抗體可抑制46℃培養(yǎng)的JH2-2對(duì)膠原蛋白Ⅰ的黏附,這種抑制作用與其稀釋度呈負(fù)相關(guān).構(gòu)建的原核表達(dá)載體pQE30/Ace在E.coli M15中成功地表達(dá),純化的重組Ace蛋白具有膠原黏附活性.

糞腸球菌Ace重組蛋白的表達(dá)、純化及黏附活性研究

作 者: 武楠 顏向軍 劉亞琴 鄒禮衡 楊祚升 WU Nan YAN Xiang-jun LIU Ya-qin ZOU Li-heng YANG Zuo-sheng   作者單位: 武楠,楊祚升,WU Nan,YANG Zuo-sheng(南華大學(xué),附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖南,衡陽,421001)

顏向軍,劉亞琴,鄒禮衡,YAN Xiang-jun,LIU Ya-qin,ZOU Li-heng(南華大學(xué),附屬第一醫(yī)院血液科,湖南,衡陽,421001) 

刊 名: 微生物學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名: JOURNAL OF MICROBIOLOGY  年,卷(期): 2008 28(3)  分類號(hào): Q939.93  關(guān)鍵詞: 糞腸球菌   Ace   重組蛋白   蛋白純化   黏附  

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