淀粉酶活性測定方法的改進-李雯

植物生理學通訊　　第４１卷　第５期，２００５年１０月655

淀粉酶活性測定方法的改進

李雯１，２　　邵遠志１　　陳維信２，＊

１

海南大學生命科學與農(nóng)學院，�？冢担罚埃玻玻�；２華南農(nóng)業(yè)大學園藝學院第一文庫網(wǎng)，廣州５１０６４２

Improved Method for Determining Amylase Activity

LI Wen1,2, SHAO Yuan-Zhi1, CHEN Wei-Xin2,*

1

College of Life Science and Agriculture, Hainan University, Haikou 570228, China; 2College of Horticulture, South ChinaAgricultural University, Guangzhou 510642, China

提要　　以香蕉果實為試材，對常規(guī)的淀粉酶活性的測定方法進行了改進，取得了更好的效果。關鍵詞　　淀粉酶活性；測定方法；

改進

淀粉酶是反映淀粉分解速度、研究糖代謝規(guī)律的一個重要指標之一。香蕉是典型的貯藏淀粉的果實，果實采后其淀粉轉化為可溶性糖。了解淀粉酶活性的變化規(guī)律對研究香蕉果實采后生理及貯藏保鮮十分重要。測定淀粉酶活性常采用的是酶動力學方法中的化學法［１］。果實淀粉酶活性的測定一般是借鑒文獻２￣４的方法，但這些方法在測定香蕉果實淀粉酶活性時，操作繁瑣，重復性較差。本文就酶液的提取、反應步驟的取舍等方面對這些方法作了改進，取得了較好的效果。

劑為國產(chǎn)分析純試劑。２．２　　測定方法

２．２．１　　酶液的提取　　將每一個重復的３個果實去皮后切碎混勻，稱取其果肉１　ｇ，置于預冷的研缽中，加２�。恚填A冷的０．１　ｍｏｌ·Ｌ－１檸檬酸溶液（ｐＨ５．６）和少量石英砂研磨，將勻漿移入７�。恚痰碾x心管中，再分別用１�。恚痰模埃�１　ｍｏｌ·Ｌ－１檸檬酸緩沖液（ｐＨ�。担�６）沖洗２次，　于４℃下以１５�。埃埃啊粒珉x心１５ｍｉｎ，上清液轉移入另一個５�。恚屉x心管中，作為酶提取液備用。

２．２．２　　酶活性的測定　　取潔凈的試管１８支，作好標記，每一個樣品設１個對照。總反應體積為０．５ｍＬ，測定管含０．２　ｍＬ的酶提取液和０．３�。恚痰模保サ矸廴芤海粚φ展芎�０．２�。恚痰拿柑崛∫汉停埃�３�。恚痰模埃�１�。恚铮臁ぃ蹋�１　檸檬酸溶液（ｐＨ�。担�６，　不含底物淀粉）。將試管放入恒溫４０℃的水浴鍋中，保溫３０�。恚椋詈笕〕�，立即加入１．５　ｍＬ的ＤＮＳ試劑終止反應。再將試管置于沸水浴中１０　ｍｉｎ，取出后冰浴冷卻。取反應液稀釋１０倍，測定波長５２０　ｎｍ處的吸光值，同上做麥芽糖標準曲線，從標準曲線上查出麥芽糖的含量，計算淀粉酶的總活性。

上述的酶的提取和測定，與文獻２的常規(guī)方法相比較，有以下４個改進：（１）可用緩沖液作為淀粉酶的提取液和底物淀粉的溶液；（２）將原來的

材料與方法

１　　材料

實驗在華南農(nóng)業(yè)大學的廣東省果蔬保鮮重點實驗室進行。材料為巴西香蕉果實（Ｍｕｓａ�。螅穑穑��。粒粒粒牵颍铮酰穑��。茫幔觯澹睿洌椋螅瑁�，購自水果市場。試材選３種成熟度差異非常明顯的果實進行測定：（１）綠熟硬果，（２）中等黃熟微軟果，（３）黃熟極軟果。所選果實大小一致、無病蟲害、無機械傷，每類果實９個果，重復３次。２　　方法

２．１　　試劑配制　　淀粉酶提取緩沖液：０．１�。恚铮臁ぃ蹋�１檸檬酸溶液（ｐＨ�。担�６）；　１％的淀粉溶液：用０．１�。恚铮臁ぃ蹋�１的檸檬酸緩沖液（ｐＨ�。担�６）配制；標準麥芽糖溶液（１�。恚纭ぃ恚蹋�１）；　３，５－二硝基水楊酸試劑（ＤＮＳ試劑）：　稱�。叮�５�。纭。�，５－二硝基水楊酸溶于少量水中，移入１�。埃埃啊。恚倘萘科恐�，加入３２５�。恚獭。病。恚铮臁ぃ蹋�１�。危幔希热芤�，再加入４５�。绫�三醇，搖勻，冷卻后定容到１　０００�。恚�。淀粉和麥芽糖為Ｓｉｇｍａ產(chǎn)品，其余試

656植物生理學通訊　　第４１卷　第５期，２００５年１０月

３次稀釋步驟改為只稀釋１次；（３）不用ＮａＯＨ溶液

終止反應，而用ＤＮＳ試劑顯色同時終止反應；（４）耗時從５�。琛�減少到３．５�。琛�

結果是一致的，說明改進方法可以反映香蕉果實后熟過程中淀粉酶活性的變化情況，具有可操作性；（２）常規(guī)方法測得的淀粉酶活性比改進方法測得的低，２種方法測得的３種成熟度果實的酶活性分別相差０．３３８、０．３５１和０．２５１�。恚纭ぃ纾�１（ＦＷ）·ｈ－１，表明改進的方法可測得更高的淀粉酶活性；（３）３種成熟度果實中淀粉酶活性的標準誤值和變異系數(shù)都小于常規(guī)方法，說明改進的方法其實驗誤差比常規(guī)方法小。

結果與討論

從表１可以看出：（１）綠熟硬果、中等黃熟微軟果、黃熟極軟果３種不同成熟度的果實淀粉酶活性表現(xiàn)出低、高、低的趨勢，各成熟度果實間存在極顯著差異（Ｐ＜０．０１），２種測定方法得到的

表１　　香蕉果實中淀粉酶活性測定方法的比較

酶活性／ｍｇ·ｇ－１（ＦＷ）·ｈ－１　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　標準誤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　變異系數(shù)／％

果實類別　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　常規(guī)方法　　　　　　　　　　　　　　　　改進方法　　　　　　　　　　　　　常規(guī)方法　　　　　　　　　　　　　　改進方法　　　　　　　　　　　　常規(guī)方法　　　　　　　　　　　　　　改進方法

綠熟硬果中等黃熟微軟果黃熟極軟果

１．５３４Ｂ２．１４７Ａ０．５５５Ｃ

１．８７２Ｂ２．４９８Ａ０．８０６Ｃ

０．３０３０．３３００．２８７

０．１２６０．１９６０．１１５

１９．７６０１５．４１２５１．７１２

６．７４８　　７．８３４１４．２４２

常規(guī)方法（對比測定）使用文獻２的方法。

酶活性的測定受多種因素的影響［５］。通過以上實驗，我們認為還須特別注意以下幾點：（１）取樣前，要把水浴鍋的水溫調整到需要的溫度，為后續(xù)的反應過程做好準備；（２）研磨樣品和轉移樣品時，速度要快，準確，以避免樣品損失帶來的誤差；（３）酶反應時，先往反應管中加底物溶液，后加酶提取液，而且一次不要做太多的樣品，以避免加樣先與后的時間差異對實驗結果的影響；（４）測定吸光值時，先要檢查比色杯是否有差異，哪怕是微小的差異也要避免，以防止結果呈現(xiàn)負值的現(xiàn)象發(fā)生（由于比色杯本身的差異可造

成對照管的吸光值大于樣品管的吸光值）。

參考文獻

１２３４

陳石根，周潤琪編著．酶學．上海：復旦大學出版社，２００１．　２２１￣２２８

韓亞珊主編．　食品化學實驗指導．　北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，１９９６．�。保埃叮�１０９

李合生主編．植物生理生化實驗原理和技術．　北京：高等教育出版社，２０００．�。保叮梗�１７２

周蓓云．　α－和β－淀粉酶活性的測定．　見：中國科學院上海植物生理研究所，上海市植物生理學會編．　現(xiàn)代植物生理學實驗指南．　北京：科學出版社，１９９９．�。保玻常�１２４

彭志英編著．　食品酶學導論．　上海：中國輕工業(yè)出版社，２００２．�。保保�１５

５

【淀粉酶活性測定方法的改進-李雯】相關文章：

教學實驗中硝酸還原酶活性測定方法的改進04-30

水中溴化物的測定方法改進04-28

一種微量、快速測定植物種子β-淀粉酶活性的方法04-27

高錳酸鹽指數(shù)測定方法的創(chuàng)新與改進04-26

高濃度總磷測定方法的改進04-28

碘酸鉀食鹽碘離子測定方法的改進04-29

蒙脫石含量測定方法改進研究04-29

α-半乳糖苷酶活性測定方法的研究05-02

天然產(chǎn)物抗氧化活性的測定方法和原理04-30

重鉻酸鉀法測定化學需氧量加熱方法的改進04-26