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蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術
蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術
毛紅麗
(襄陽職業(yè)技術學院.湖北寰陽441050)
【摘要】探討了蝴垛蘭的組織培養(yǎng)技術和方法。實驗證明:用幼葉在散射光下培養(yǎng)誘導蝴蝶蘭原球莖的效果最好,最適培養(yǎng)基為:MS+6一BAlomg/L+NAAlmg/L水解乳蛋白500mg/L+蔗培養(yǎng)基為:MA+6一BA2mg/L+NAAlmg/L+
309/L+瓊脂79/L(pH值5.4);曩適增殖
解乳蛋白500mg/L+蔗.糖309/L+瓊..脂79/L(pH值5.4);曩適生根長苗培
79/L(pH值5.4)。
養(yǎng)基:1/2MS+IBAl.5mg/L+NAA0.05mg/L+O.3%/g"性炭+蔗糖309/L+瓊.
[關鍵詞】蝴蝶蘭;原球莖;組織培養(yǎng)
蝴蝶蘭是單莖性氣生蘭.植株極少發(fā)育側芽,且種子極難萌發(fā),對其進行常規(guī)性的繁殖,增殖速度很m.oriental01.com慢。影響了它的推廣和應用。筆者通過對蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術的研究。旨在提高
蝴蝶蘭的繁殖系數(shù)。
2個月后統(tǒng)計原球莖的增殖倍數(shù)和原球莖的大小。
以上培養(yǎng)基中另添加500me/L的水解乳蛋白。79/L瓊脂和30dL蔗糖,pH值5.4。培養(yǎng)條件均為25℃,光照時間16h。光照
強度20001)【。1.3壯苗與生根
1材料與方法
將增殖培養(yǎng)所得到的蝴蝶蘭小苗轉接到各種生根培養(yǎng)基(見表4),每處理10瓶,每瓶3株,重復3次。培養(yǎng)30d后統(tǒng)計
1.1實驗材料苗的生長情況和生根率、平均生根率。
生根培養(yǎng)基中加入0.3%的活性碳+蔗糖309/L+瓊脂79n.。
培養(yǎng)條件均為25℃,光照時間16h.光照強度2000h。
從陜西省西安市鼎天農(nóng)業(yè)科技有限公司購買的大紅品系的34月齡蝴蝶蘭幼苗。
1.2實驗方法
1.2.1外植體的消毒。從蝴蝶蘭植株上取下幼葉(分14d、30d)
2結果與分析
和氣生根尖,放在自來水下沖洗干凈。在超凈工作臺上,將葉和根尖放入無菌瓶。用75%酒精消毒30s。然后用無菌水清洗2.3遍.再用0.1%升汞溶液浸泡lOmin(分鐘),用無菌水沖洗4—5
遍后待用。
1.2.2原球莖的誘導。將幼葉切成5x5mm見方的小塊和10ram長根尖,平放或按極性接種以MS為基本培養(yǎng)基。添加激索
2.1
不同的外檀體誘導原球莖的差異
對蝴蝶蘭根尖、生長齡為14d的幼葉和生長齡為30d的葉
進行原球莖的誘導實驗。結果表明(表1):幼葉的誘導率最高為47%。它的褐變率最低。只有6%。成熟葉的誘導率很低且褐化嚴
重到47%。而根尖沒有誘導出原球莖。可見生長齡為14,t幼葉
NAAImg/L和不同的濃度BA(2mUL、4mg/L、6mg/L、8ms/L、10mg/L)配比的誘導培養(yǎng)基上,并設置散射光和2000h兩種作
比較,每瓶接種一個.每處理10瓶.重復3次。培養(yǎng)2個月后觀
最有利于原球莖的產(chǎn)生。還發(fā)現(xiàn)在同一葉片上.葉基部的切塊
較葉中和葉尖的切塊誘導率高。對于比較小的幼葉,未切割時
也能誘導出原球莖。
2.2不同濃度的BA對原球莖誘導的影響
選用生長齡為14d.大小為lem左右、葉色墩綠的葉片為誘導材科。滅菌后接種到含不同濃度的BA培養(yǎng)基上培養(yǎng)。堵養(yǎng)15—20d發(fā)現(xiàn)葉片被切割周圍產(chǎn)生淺綠色的原球莖狀小突起.很次.能有效地控制菌核病的漫延。老黃葉也是菌核病和霜霉病等病害傳播源.容易將病害傳剄其他葉片,尤其受凍葉霜霉病重。摘除老黃葉則可防治或減輕菌核病等病害的發(fā)生。促進植株的生長發(fā)育。另外。油菜生長中后期要加強對蚜蟲的防治,減
輕病蟲害損失。
察統(tǒng)計不同外植體在不同培養(yǎng)基中原球莖的誘導率及生長情況。1.2.3原球莖的增殖。將誘導的原球莖按3—5個為一團接種剄以MS為基本培養(yǎng)基添加激素NAAlmsa..和不同的濃度BA(0、2mgIL、4mg/L、6maL、8mg/L、10me/L)配比的增殖培養(yǎng)基中,培養(yǎng)苗肥多、長勢好的田塊一般不提倡在開春后施追肥.以免造成
貪青倒伏。
2.3加強病蟲害管理
菌核病是油菜的主要病害,開花期和角果發(fā)育期最易發(fā)生,一般年份可減產(chǎn)l一3成.嚴重的可以造成大幅度減產(chǎn)甚至絕收.因此防治苗核病是實現(xiàn)油菜豐收的重要環(huán)節(jié)。首先要抓
好清溝排潰.捧除田間漬水.降低田問濕度.從而茂小病菌繁殖。其次是及時藥劑躊治.可選用50%多菌靈可濕性粉卉畸0.1。
作者簡介:
張英杰(1%7一’,女.湖北璉州人,l奚職生技術學院捌教授,主要從事種植專生麓學與科研工作。
0.2kg或40%菌核凈O.1加.2kg免水50ks。在油菜花期防治1-2
—26一
萬方數(shù)據(jù)
墨絲塑!塑絲蘭笪絕堡墮鲞墊查
快發(fā)育成為原球莖。
由表2可知.不同濃度的BA對原球莖的誘導率和原球莖
的大小影響比較明品。隨著BA濃度由2m班增加到10mgl,,原
囊'
不同外粵體誘導原球莖的差異球莖的誘導率也由6_33%逐漸增大.當BA為10mg/L時.誘導率最高達41.67%.說明高濃度BA促進原球莖的誘導。
但原球莖直徑是隨BA濃度的增大。由小到大.再由大到小。BA6mg/L時原球莖的直徑最大為3.Smm。BAlomg/L時原球莖的直徑最小為0.9mm。不足1mm。在實驗中發(fā)現(xiàn)當原球莖不足Imm時。很難進一步增殖生長;誘導出的原球莖越大.越有利增殖生長。所以在原球莖的誘導實驗中。選擇BA的最佳濃度為6mg/L。
2.3不同光照條件對原球莖誘導的影響
在對原球莖進行誘導的過程中。發(fā)現(xiàn)外植體很容易褐化。抑制葉片揭化的方法是勤換培養(yǎng)基(10d換1次).及時將葉片移入新鮮的培養(yǎng)基.可減輕褐化狀況。培養(yǎng)時還發(fā)現(xiàn),褐化的程度與培養(yǎng)時的光照強度有關,當光照強度為2000Ix時.葉片褐
化的程度較嚴重.
達40%左右:當光照強度為其他培養(yǎng)架反射過來的弱散射光時.褐化得到了較好的抑制.僅為lO%左右。
2.4不同濃度BA對原球莖增殖與誘導出苗的影響
將誘導出來的原球莖轉接到增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)。表3可知.不同濃度的BA對原球莖的增殖和原球莖的大小影響比較明顯。隨著BA濃度的增加,原球莖增殖倍數(shù)逐漸增加但原球莖的大小呈先升后下降趨勢。當BA為10m#L時。原球莖的增殖倍數(shù)雖達到最高7.12。但原球莖的大小最小為0.9。在原球莖增殖的同時。產(chǎn)生大量的叢生芽.但叢生芽長得較為弱小;如果降低BA的濃度.當其為2mg/L原球莖的增殖系數(shù)減少。但形成的多而粗壯。所以BA的最佳濃度為2mg/L。
2.5原球莖的生根
壯苗
將增殖得到的小
苗轉入到生根壯苗.培養(yǎng)基中。由表4可知。
當基本培養(yǎng)基為1,
2MS.NAA為005mgL.IBA為1.SmgL時。苗的生根率達到最高
500%.且苗的生長勢最健壯。
萬方數(shù)據(jù)
宣登量茭墮
3討論
3.1
影響原球莖誘導的因素
在蝴蝶蘭的同體培養(yǎng)中.進行原球莖誘導的外植體選擇
時.明顯地發(fā)現(xiàn)生長肥厚的幼嫩葉片的誘導率最為理想。這與楊美純等的研究一致。在實驗中還發(fā)現(xiàn).葉基部的切塊較葉中和葉尖的切塊的誘導率高。在對葉片切割時,過多的切口會使葉片褐化死亡。所以在對幼葉切割時,將葉片從葉基部切下?梢垣@得最高的誘導率。
在原球莖的誘導過程中。BA的濃度對原球莖的誘導效率和生長勢有很大的影響。在BA為0一lOmg/L的范圍內(nèi).隨著BA濃度的升高原球莖的誘導率也在增加,但原球莖的生長勢卻不好。近年來。一些研究只報道了BA濃度對原球莖誘導率的影響。卻沒研究對誘導出的原球莖的生長勢的影響。筆者結合兩方面的比較.確定最終的BA的濃度為6mg/L.這樣誘導率比較高。且原球莖的生長狀況良好。為原球莖的進一步增殖打下基礎。光照條件也是影響原球莖誘導的一個重要因素。散射光有利于原球莖的誘導。并能有效地減輕葉片誘導時的褐化狀況。3.2影響原球莖增殪的因素
在對蝴蝶蘭原球莖的增殖實驗中研究發(fā)現(xiàn)。隨著BA濃度的增加。原球莖的增殖率提高。并且在不加BA的條件下。原球莖也能增殖.這可能是原球莖自己體內(nèi)已積累了較高水平的細胞分裂素的緣故。這與周俊輝、王芳的報道一致,但與王亦菲、彭立新的結果不同。另外。從控制遺傳變異方面考慮.不應使用高濃度的激素組合.以免原球莖多代增殖后形成異常苗。在實驗中還發(fā)現(xiàn).原球莖在切割時。不應切的太小.否則褐化情況嚴重。在接種時.原球莖應緊密的靠在一起.這樣才能生長旺盛。從實驗中可以得出原球莖在增殖生長時。具有較強的群體優(yōu)勢效應.與彭立心、馬子駿和周俊輝的報道一致。3.3影響蝴蝶蘭生根壯苗的因素
在蝴蝶蘭生根壯苗培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn).1,2MS比MS的效果好。NAA濃度對出苗率沒有多大影響;钚蕴嫉奶砑樱梢杂行Х乐乖蚯o褐化.有利于小茁的生長。參考文獻
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王芳、文峰、武破.等.激素對蝴壤蘭快速繁殖的影響U】.新疆農(nóng)業(yè)
大學學報.2003.26.(4):68-71.
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用俊輝、葉趕紅、陳旭南.等.蝴壕蘭原球堇增殖培養(yǎng)的研究【J].仲
凱農(nóng)業(yè)技術學院學報.2002.15(3):13-17.
作者簡介:
毛紅膏(1961一).女.t英職業(yè)技術學院生物工程學虎工作。
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、.
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