利用改良的草丁膦篩選系統(tǒng)快速而有效篩選轉(zhuǎn)基因大豆

為提高大豆(Glycine max(L.)Merrill)遺傳轉(zhuǎn)化效率建立了一種快速而有效的草丁膦篩選系統(tǒng).將刺傷的子葉節(jié)外植體接種于含有pCAMBIA3201載體的LBA4404農(nóng)桿菌溶液.目前利用草丁膦篩選轉(zhuǎn)基因大豆的常規(guī)方法是在含有5 mg/L草丁膦的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和含有3～5 mg/L草丁膦的芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選.利用此常規(guī)篩選方法所獲得的大多數(shù)植株是非轉(zhuǎn)化體,從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率變低,為1.6%;而且這種方法極大地延遲了芽的伸長(zhǎng)過(guò)程,使多數(shù)不定芽的伸長(zhǎng)發(fā)生在農(nóng)桿菌處理后的21～41周.為此,對(duì)常規(guī)草丁膦篩選方法進(jìn)行了改良.首先將外植體放置在不含有除草劑的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)3周,然后轉(zhuǎn)到含有4 mg/L草丁膦的芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選.此時(shí),多數(shù)不定芽?jī)H在7～12周內(nèi)便可伸長(zhǎng).當(dāng)芽長(zhǎng)到3～5 cm時(shí),從外植體上切下來(lái)轉(zhuǎn)到含有1～5 mg/L草丁膦的根誘導(dǎo)培養(yǎng)上進(jìn)行進(jìn)一步的篩選.結(jié)果表明,在添加有3 mg/L草丁膦根培養(yǎng)基上,轉(zhuǎn)化效率達(dá)到最大值為6.7%.不定芽對(duì)根培養(yǎng)基中的除草劑反應(yīng)迅速,僅在10d天內(nèi)所有非轉(zhuǎn)化體都變枯死亡.利用這種改良的篩選系統(tǒng),大多數(shù)轉(zhuǎn)基因植株僅在8～16周內(nèi)便可獲得.Southern雜交結(jié)果證實(shí)了外源基因穩(wěn)定地整合在大豆基因組中.GUS檢測(cè)和除草劑抗性分析結(jié)果表明,被整合的外源基因在大豆細(xì)胞中得到了穩(wěn)定的表達(dá).

作 者： 薛仁鎬 謝宏峰 Xue Rengao Xie Hongfeng   作者單位： 萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院生命科學(xué)院,青島,266109  刊 名： 大豆科學(xué)  ISTIC PKU 英文刊名： SOYBEAN SCIENCE  年，卷(期)： 2006 25(4)  分類號(hào)： Q943  關(guān)鍵詞： 農(nóng)桿菌   子葉節(jié)   草丁膦   大豆   遺傳轉(zhuǎn)化   Agrobacterium tumefaciens   Cotyledonary node   Glufosinate   Soybean   Transformation  

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