腺病毒介導(dǎo)的白介素10基因體外轉(zhuǎn)導(dǎo)大鼠β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干細(xì)胞

目的 研究腺病毒介導(dǎo)的白介素10(interleukin 10,IL-10)基因(AdlL-10)體外轉(zhuǎn)導(dǎo)β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干細(xì)胞(bone marrow-derived liver stem cell,BDLSC)的可行性.方法 利用免疫磁珠細(xì)胞分選(magnetic bead cell sorting,MACS)方法分選大鼠β2m-/Thy-1+BDLSC,RT-PCR法鑒定其肝相關(guān)性表型的表達(dá).AdIL-10轉(zhuǎn)導(dǎo)BDLSC,根據(jù)腺病毒攜帶的綠色熒光蛋白表達(dá)率測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,采用RT-PCR法和ELISA法分別檢測(cè)IL-10的基因表達(dá)和蛋白分泌水平.采用MTT法和免疫熒光染色法分別檢測(cè)腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)BDLSC增殖能力和肝細(xì)胞樣表型白蛋白(albumin,ALB)表達(dá)的影響.結(jié)果 MASC法能成功分選純化BDLSC,其在基因水平表達(dá)肝細(xì)胞樣表型.AdIL-10轉(zhuǎn)導(dǎo)BDLSC的效率呈劑量依賴(lài)性,最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)為500 pfu/eell.AdIL-10修飾BDLSC高表達(dá)IL10基因,且持續(xù)高濃度分泌IL-10蛋白至胞外.AdIL-10轉(zhuǎn)導(dǎo)72 h后,BDLSC仍保持正常的增殖能力和ALB表達(dá).結(jié)論 BDLSC是AdIL-10轉(zhuǎn)導(dǎo)的適宜載體,為AdIL-10修飾BDLSC這一新型結(jié)合方式用于慢性肝病的治療奠定了實(shí)踐基礎(chǔ).

作 者： 蘭玲 陳源文 孫超 孫巧玲 李定國(guó) LAN Ling CHEN Yuanwen SUN Chao SUN Qiaoling LI Dingguo   作者單位： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院,新華醫(yī)院消化內(nèi)科,上海,200092  刊 名： 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY  年，卷(期)： 2008 17(1)  分類(lèi)號(hào)： Q813 Q7.82  關(guān)鍵詞： 骨髓源性肝干細(xì)胞   腺病毒載體   白介素10   基因轉(zhuǎn)導(dǎo)  

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